Práctica mitosis

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES EN MITOSIS

Objetivo:

En esta actividad intentaremos observar e identificar las distintas fases de la mitosis en células vegetales. Para ello es necesario disponer de un meristemo en pleno crecimiento, con lo cual en un determinado momento una buena parte de sus células estarán dividiéndose. Así, al realizar la preparación microscópica, con un poco de suerte encontraremos células en cada una de las fases de la mitosis.

Muestra:

Unos días antes de realizar la práctica hay que colocar un bulbo de cebolla sobre un vaso de precipitados con agua, de modo que las raíces queden aproximadamente 2-3 cm por encima del agua. Para ello, clavaremos varios palillos a su alrededor para que quede sujeta sobre el vaso.

De este modo se provocará el crecimiento en longitud de las raíces, que podremos observar en 3-4 días.

Cuando esto ocurra, tendremos los meristemos apicales con multitud de células en mitosis y cortando el ápice de una raíz (0.5 cm) tendremos una excelente muestra.

Material necesario:

• Microscopio óptico
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Tijeras, aguja enmangada, pinzas de punta fina, palillos
• Vaso de precipitados de 250 ml
• Vidrio de reloj
• Mechero Bunsen y pinzas de madera 
• Papel de filtro y cubeta de tinción
• Alcohol de 96º
• Colorantes: orceína A y orceína B

Atención!

• Es imprescindible conocer las diferentes fases de la mitosis para poder identificarlas en células reales.
• Los colorantes biológicos manchan mucho y en la ropa dejan marcan indelebles (¡ojo!).
• La preparación de la muestra es muy delicada y necesita una gran precisión y cuidado durante todo el proceso. Si no se siguen estrictamente las recomendaciones es muy probable que no observemos las mitosis.
• El calentamiento de una muestra para microscopía se realiza siempre sin dejar que la llama toque directamente el vidrio (más arriba) y sin que el colorante llegue a hervir. Para asegurarse de ello, regularmente retiraremos el vidrio del calor y comprobaremos su temperatura con el dorso de la mano (con cuidado para no quemarse) y esperando un momento antes de volver a ponerlo al mechero.
• El puesto de trabajo, así como todo el material e instrumentos utilizados deben quedar limpios y ordenados tras la actividad.

Fundamento

• La orceína A tiñe las membranas
• La exposición al calor reblandece las membranas y permite que penetre el siguiente colorante.
• La orceína B tiñe de un color morado los cromosomas (es un colorante con especial afinidad por el ADN).
• Al utilizar un tejido con abundantes células en división podremos sorprender a ejemplares en todas las fases de la mitosis.

Procedimiento

1. Obtención de la muestra: cortar el ápice de una raíz, aproximadamente los 5 mm. finales (mejor utilizar dos o tres raíces, por si se estropea una) y depositarlo con ayuda de la aguja enmangada en un porta (esta operación debe hacerse con sumo cuidado). Colocar a continuación sobre un vidrio de reloj.
2. Primera tinción: cubrir totalmente con orceína A (usar 2-3 ml) y dejar actuar durante 2 minutos.
3. Fijación y reblandecimiento de membranas: sujetando el vidrio con las pinzas de madera, calentar al mechero suavemente (sin exponer directamente a la llama) durante 8 minutos sin permitir que llegue a entrar en ebullición, retirando frecuentemente el vidrio del mechero. Hay que cuidar que el colorante cubra totalmente la muestra, añadiéndolo poco a poco a medida que se evapora.
4. Segunda tinción: tras dejar reposar durante 10 minutos, se toman las muestras con las pinzas de punta fina y se depositan en un porta. Cubrir con unas gotas de orceína B y dejar que actúe el colorante durante 3 minutos.
5. Observación: colocar un cubreobjetos sobre la muestra y sobre éste un trozo de papel de filtro para que absorba el colorante sobrante. Colocar sobre el cubre un trocito (doblado dos veces) de papel de filtro y luego presionar suave y firmemente con el dedo pulgar, girando éste levemente para aplastar la raicilla. Limpiar completamente los bordes con un nuevo trozo de papel. Situar en la platina del microscopio y comenzar la observación a pequeño aumento, localizando células en distintas fases de la mitosis y pasando entonces a mayores aumentos.

Microfotografías tomadas de la web de José A. Cortés